3种瞬时表达体系研究1个白木香倍半萜合酶的亚细胞定位

• 作者: 刘晓东 孟冬 赵文婷 高志晖 魏建和
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 白木香 倍半萜合酶 亚细胞定位 瞬时表达技术 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（23）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 3379-3385
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.23.022

摘要

目的 研究1个白木香倍半萜合酶(ASS)的亚细胞定位,确定其功能区域,并比较3种瞬时表达体系在亚细胞定位研究中的优劣.方法 从白木香愈伤组织中提取总RNA,采用特异引物RT-PCR方法克隆倍半萜合酶ASS基因,并连接于pEZS-NL载体和pFGC5941GFP改造载体上,分别构建pFGC5941-GFP-ASS、pEZS-NL-ASS-GFP 2种植物表达载体,分别利用根癌农杆菌侵染烟草叶片、基因枪轰击洋葱表皮细胞、PEG转化白木香原生质体3种技术进行瞬时转化表达,激光共聚焦显微镜下观察表达出的绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的亚细胞定位.结果 在烟草叶片表皮细胞、洋葱表皮细胞及白木香原生质体中,融合蛋白绿色荧光均能被观察到.ASS基因与GFP的融合蛋白产物在烟草叶片中定位于胞质,在洋葱表皮中定位于胞质和细胞核,白木香原生质体中定位于胞质和质体.结论 ASS基因在白木香原生质体胞质及质体定位;对3种体系的结果比较表明,应用不同体系研究蛋白的亚细胞定位可能出现不同的结果,这可能与同源或异源表达的植物细胞的特性有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓东		87	770	15.0	21.0
2	孟冬		8	56	4.0	7.0
3	高志晖	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	5	77	4.0	5.0
4	赵文婷	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	2	18	2.0	2.0