新生大鼠视皮层神经元的原代培养及鉴定

• 作者: 宋海岩 赵超 连辉 邓晓慧
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: 视皮层 神经元 原代培养 大鼠
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 733-735
• 页数: 3页
• 字数: 3234字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨新生大鼠视皮层神经元的原代培养方法,以获取数量多、纯度高的视皮层神经元.方法 取新生1d内的SD大鼠视皮层,通过胰酶消化法获取单细胞悬液,倒置相差显微镜下计数后种植于6孔培养板内培养.培养24 h后用终浓度10μmol·L-1阿糖胞苷处理,抑制非神经元的生长,作用24h后半量换液,以后每隔1d半量换液1次.每天倒置相差显微镜下观察细胞的生长状况和形态变化,Nissl染色法进行视皮层神经元鉴定,免疫荧光显示神经元特异性烯醇化酶鉴定培养视皮层神经元的纯度.结果 接种4h后,大部分细胞已贴壁,细胞立体感较强；接种后24h,大部分细胞长出短的突起,细胞形态发生变化,胞体呈多边形或三角形,细胞周围有或多或少的光晕；培养4d后,细胞突起伸长、增粗；培养6～8d后,细胞状态较佳,细胞胞体饱满,光晕明显,突起进一步伸长、增粗,且分支多,突起交织成网状,非神经元细胞减少,为实验的最佳时间；培养14 d后,细胞开始退化.培养6d行焦油紫染后,倒置相差显微镜下观察,可见细胞内的尼氏体呈蓝紫色的颗粒或斑块.免疫荧光染色结果显示,原代培养的细胞中,大部分细胞为绿染细胞,形态良好,核大而清晰,神经元所占比例高.结论 本研究获得视皮层神经元的方法简单经济,通过形态学观察、Nissl染色及免疫荧光染色可以对体外培养的视皮层神经元细胞进行准确鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓晓慧	新乡医学院基础医学院解剖学教研室	45	154	7.0	10.0
2	宋海岩	新乡医学院基础医学院解剖学教研室	36	81	5.0	7.0
3	连辉	新乡医学院基础医学院解剖学教研室	14	17	3.0	3.0
4	赵超		3	5	2.0	2.0