大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养与鉴定*☆

• 作者: 卫肖艳 张莉 彭博 彭园园 李富运 林明 洪培馨 范伊凡 陈欢
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 干细胞培养与分化 内皮祖细胞 单个核细胞 密度梯度离心法 细胞培养 细胞鉴定 管腔形成 国家自然科学基金 干细胞图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（14）
• 页码范围: 2570-2577
• 分类号: R394.2
• 字数: 7525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.14.015

摘要

背景:内皮祖细胞因其分离与培养的方法各不相同,在实验中难以重复.目的:探讨大量获取骨髓源性内皮祖细胞分离与培养的方法.方法:通过密度梯度离心法从4周龄 SD 大鼠骨髓中分离单个核细胞,使用 EGM-2 MV 培养基进行诱导培养,采用形态学特征观察、摄取 Dil-Ac-LDL 与结合 FITC-UEA-1实验、免疫荧光化学鉴定其表面抗原 CD133与 VEGFR2等方法对其进行鉴定,并通过管腔形成实验观察形成管腔的能力.结果与结论:①形态学观察:分离的骨髓单个核细胞经诱导培养后,在生长的早期(8 d 左右)、晚期(15 d左右)其细胞形态有一定差异,早期以纺锤形、三角形、圆形细胞多见,晚期以圆形、短梭形细胞多见.②摄取 Dil-Ac-LDL 与结合 FITC-UEA-1实验:显示8,21 d 的细胞均为阳性.③免疫荧光化学染色:8 d的细胞表达 CD133、VEGFR2.④管腔形成实验:在 Matrigel 基质上15 h 左右能够生成血管样结构.结果表明:利用密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞后以 EGM-2 MV 进行诱导培养,经过鉴定证明获得的细胞符合内皮祖细胞的特征.这种方法能够简单、快速、可靠、大量地获取内皮祖细胞.