慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究

• 作者: 张宁坤 徐小红 朱智明 王力 郑楠 高连如
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 间质干细胞 慢病毒属 遗传载体 转染 基因表达 apelin
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1137-1141
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2013.12.001

摘要

目的构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和apelin基因的重组质粒pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP并进行慢病毒包装，探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数（MOI）值及目的基因表达情况。方法化学合成目的基因片段并扩增。采用In-Fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接，转化入感受态DH5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293T细胞，包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同MOI值转染人脐带间充质干细胞，根据转染效率得到最佳MOI值，并采用Real-time-PCR及Western blot方法检测目的基因表达情况。结果通过PCR扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284 bp的目的基因片段，与慢病毒质粒载体连接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重组质粒，测序结果与预期完全符合，并成功包装慢病毒颗粒。最佳MOI值为20，转染效率为（90.32±3.61）%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mRNA及蛋白的表达。结论重组质粒慢病毒载体pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP可有效转染人脐带间充质干细胞，并可持续高表达apelin基因。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王力	第二军医大学海军临床医学院	86	371	10.0	17.0
3	高连如	中国人民解放军海军总医院心脏中心	13	42	5.0	6.0
4	张宁坤	中国人民解放军海军总医院心脏中心	10	39	3.0	6.0
5	朱智明	中国人民解放军海军总医院心脏中心	32	74	5.0	7.0
6	郑楠	中国人民解放军海军总医院心脏中心	17	56	5.0	7.0
9	徐小红	中国人民解放军海军总医院心脏中心	2	12	2.0	2.0