小鼠胰岛密度梯度离心方法的研究

• 作者: 严盛 厉智威 张金花 方程 田阳 邵益 郑树森
• 来源期刊: 浙江医学
• 关键词: 胰岛 分离纯化 密度梯度离心
• 年，卷（期）: 2013,（24）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2152-2154
• 页数: 3页
• 字数: 3005字
• 语种: 中文

摘要

目的探索最优的密度梯度离心方案，提高胰岛的纯度和得率，为胰岛移植相关研究奠定基础。方法采用雄性Balb/c小鼠作为供体分离胰岛，以0.5mg/ml胶原酶Ⅺ灌注和消化胰腺，通过不同的密度梯度离心策略分离纯化胰岛，进行双硫腙（DTZ）特异染色法染色，显微镜下观察胰岛的纯度和得率，并通过吖啶橙（AO）/碘化丙啶（PI）染色检查分离获得的胰岛活性，最终确定最佳的密度梯度离心方法。结果 Balb/c小鼠在Ficol-1.108（4ml）、1.096（2ml）、1.069（2ml）、HBSS（2ml），加速度1、减速度1、400r/min、4min中转1800r/min、8min离心后胰岛得率为（125±39）IEQ、纯度为（79.6±10.5）%，经相同条件二次梯度后得率无明显降低但纯度明显提高，达（96.2±1.4）%。经AO/PI染色鉴定分离胰岛活性良好。结论本研究所采用的小鼠胰岛密度梯度离心方法很有效，能稳定地获得纯度较高且数量可观的胰岛。