采用Red重组系统敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因

• 作者: 何晓梅 余华 张克斌 熊浚智 盛哈蕾 蔡文强 谢玮
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 弹性蛋白酶 基因敲除 Red重组系统
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-132,137
• 页数: 5页
• 分类号: R378
• 字数: 3136字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.02.005

摘要

目的 敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,获得无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株.方法 采用PCR从pKD46质粒上扩增λ噬菌体的Red重组酶基因,并将其克隆到大肠杆菌和铜绿假单胞菌穿梭质粒pUCP多克隆位点上,电击转化铜绿假单胞菌PAO1感受态细胞,构建PAO1/pUCP-Red基因敲除体系.常规基因操作构建两端与弹性蛋白酶基因上、下游同源,中间为庆大霉素抗性基因的线性打靶片段;并将其电击转化pUCP-Red/PAO1感受态;采用庆大霉素和羧苄青霉素抗性平板初步筛选阳性重组菌;通过PCR、RT-PCR及弹性蛋白酶活性检测方法,鉴定菌株弹性蛋白酶基因的敲除情况.结果 本研究通过构建Red重组系统,获得了无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株.结论 本研究成功敲除了铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,所获无弹性蛋白酶活性的菌株将为系统深入研究弹性蛋白酶在铜绿假单胞菌致病性中的详细作用机理提供材料和基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张克斌	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	29	184	7.0	13.0
2	何晓梅	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	9	30	3.0	5.0
3	盛哈蕾	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	6	14	2.0	3.0
4	余华	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	3	22	2.0	3.0
5	熊浚智	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	1	9	1.0	1.0
6	蔡文强	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	1	9	1.0	1.0
7	谢玮	第三军医大学附属新桥医院医学实验技术中心	2	10	1.0	2.0