与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在肝细胞癌浸润转移中的作用

• 作者: 刘碧英 李坚
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌 微RNAs 细胞支架蛋白质类 肿瘤转移
• 年，卷（期）: 2013,（36）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 5-10
• 页数: 6页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4843字
• 语种: 中文

摘要

目的 筛选肝癌细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在肝癌浸润转移中的作用.方法 ①实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的肝癌细胞系HepG2和HepG2-X细胞及SF7721和SMMC-7721细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SF7721和SMMC-7721细胞)用于以下实验.②用miRNA芯片筛选SF7721和SMMC-7721细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.Uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/vS/)和PICTAR (http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SF7721细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SF7721细胞中ezrin mBNA和蛋白表达的调控作用,以来做任何处理者为空白对照.结果 ①SF7721细胞中ezrin mRNA的表达水平是SMMC-7721细胞的(62.53±4.37)倍,HepG2-X细胞中ezrin mRNA的表达水平是HepG2细胞的(2.61±0.23)倍,两者分别比较,差异均有显著性(P＜0.01);蛋白印迹法检测显示,SF7721细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SMMC-7721细胞,HepG2-X细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HepG2细胞.选取其中ezrinmRNA和蛋白表达差异相对较大的l对细胞系,即SF7721和SMMC-7721细胞用于以下实验.②将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SF7721和SMMC-7721细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SMMC-7721细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SF7721细胞的(7.21±1.16)和(8.52±1.43)倍,两者分别比较,差异均有显著性(P＜0.01).miRNA转染SF7721细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.27±0.26)倍,两者比较,差异无显著性(P＞0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的肝癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA-miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制肝癌细胞浸润转移的潜在功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李坚	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	52	328	10.0	15.0
2	刘碧英	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	8	161	4.0	8.0