摘要:
目的 观察LY294002、雷帕霉素、曲安奈德对体外培养血管瘤内皮细胞中p110、p-Akt、Akt调控的影响,探讨调控PI3K/Akt信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用.方法 用组织块结合酶消化法培养血管瘤内皮细胞,建立血管瘤血管内皮细胞系,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定.待细胞处于对数生长期,换无血清培养液孵育48 h使细胞同步化,然后加入25μmol/L LY294002、10 nmol/L雷帕霉素、1.0 g/L的曲安奈德继续孵育24h,检测血管瘤内皮细胞中p110、p-Akt及Akt的蛋白表达水平,同时检测血管瘤内皮细胞周期分布及细胞凋亡率,分析p110、p-Akt及Akt的表达水平与体外培养血管瘤内皮细胞周期分布及凋亡的相关性.结果 干预24 h后,LY294002组p110和p-Akt的表达水平分别为0.188±0.012和0.091±0.021,雷帕霉素组p110和p-Akt的表达水平分别为0.145±0.007和0.093±0.004,与对照组0.371±0.036和0.224±0.013比较,差异均有统计学意义(P<0.01);曲安奈德组干预24 h后p110蛋白表达水平为0.100±0.004,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),而p-Akt蛋白则未见表达.细胞周期阻滞于G0/G1期的比例增高:LY294002组为(93.813±2.656)%、雷帕霉素组为(88.307±3.667)%、曲安奈德组为(92.937±0.595)%,与对照组(60.883±6.231)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05).凋亡细胞比例增加:LY294002组(11.243±2.347)%,雷帕霉素组(14.407±1.771)%,曲安奈德组(3.983±0.666)%,与对照组(0.507±0.035)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).而总Akt蛋白表达水平无变化.结论 PI3K/Akt信号通路可能参与体外培养血管瘤内皮细胞凋亡的调控.LY294002、雷帕霉素、曲安奈德可能通过干预PI3K/Akt信号通路中相应的靶点,抑制p110激活,阻碍Akt磷酸化,使体外培养血管瘤内皮细胞停滞于G0/G1期并诱导其凋亡.