转染胸苷磷酸化酶基因对5'-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响

• 作者: 刘剑 刘影 叶钿均 张继民 王绮雯 高庆
• 来源期刊: 中华外科杂志
• 关键词: 结肠肿瘤 胸苷磷酸化酶 氟尿嘧啶
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 636-640
• 页数: 5页
• 字数: 4866字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5815.2013.07.014

摘要

目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶(TP)基因后转化5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)为氟尿嘧啶(5-FU)能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法(HPLC)检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度(IC50).结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95％左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加(695±172)倍(t=-7.00,P=0.002)和(282±87)倍(t=-5.61,P=0.030),Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加(t=19.406 ～66.921,P＜0.01).5′-DFUR对SW480的IC50由(1641±53) μmol/L降至(587±17) μmol/L(t=-32.59,P＜0.01);对LOVO的IC50由(1607±57) μmol/L降至(1088±89) μmol/L(t=-8.52,P＜0.01).结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘剑	广州医科大学第二附属医院胃肠外科	2	8	2.0	2.0
2	叶钿均	广州医科大学第二附属医院胃肠外科	3	16	3.0	3.0
3	张继民	广州医科大学第二附属医院胃肠外科	6	21	3.0	4.0
4	刘影	广州医科大学第二附属医院核医学科	5	10	2.0	3.0
5	高庆	广州医科大学第二附属医院胃肠外科	1	5	1.0	1.0