采用正交设计法优化梨SSR-PCR体系

• 作者: 孙毅 段永红 毕红园 王长彪 郭黄萍
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 梨 SSR 正交设计 PCR
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 111-115
• 语种: 中文

摘要

为了建立适宜梨树SSR-PCR的反应体系和扩增程序,采用正交设计L16(45)对影响梨树SSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,PCR结果用DPS数据处理软件分析,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适用于梨树的SSR反应体系.在10 tL的反应体系中,模板DNA的用量为50.0 ng,Taq DNA聚合酶的用量为1.4U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.1 mmol/L,引物的浓度为0.5 μmol/L.扩增程序为:94℃预变性3min；94℃变性1 min,57℃(依引物不同而改变)退火45 s,72℃1 min,35个循环；72℃延伸10 min.4℃保存.选用24个梨品种对该体系进行稳定性验证,结果证明该体系可用于梨树SSR标记的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段永红	山西农业大学农学院	52	412	9.0	19.0
2	孙毅	山西省农业科学院生物技术研究中心	143	2581	25.0	44.0
4	王长彪	山西省农业科学院生物技术研究中心	32	211	8.0	13.0
7	毕红园	山西大学生物工程学院	10	59	4.0	7.0