真盐生植物盐穗木HcWD-40蛋白的亚细胞定位

• 作者: 易小娅 曾幼玲 李玲 杨瑞瑞
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 盐穗木 WD-repeat蛋白基因 绿色荧光蛋白(GFP) 载体构建 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 页码范围: 1058-1063
• 页数: 6页
• 分类号: S188+.2
• 字数: 3406字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2013.06.012

摘要

[目的]WD-repeat蛋白是一类结构高度保守的蛋白质家族,常分布于细胞质或细胞核内,具信号转导、染色体组装,转录调控等多种功能.实验对极端耐盐的藜科真盐生植物盐穗木的WD-40蛋白进行亚细胞定位,初步探讨该基因参与盐穗木耐盐抗旱的机制.采用绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,对真盐生植物盐穗木HcWD-40基因的表达产物进行亚细胞水平定位.[方法]PCR扩增获得序列正确的HcWD-40,构建pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP融合基因表达载体,采用伯乐(Bio-RAD)基因枪介导的方法转化到洋葱表皮细胞中,28℃暗培养16～24 h后,以仅表达GFP的洋葱细胞作为对照,利用激光共聚焦显微镜观察GFP在洋葱表皮细胞中的分布.[结果]重组载体pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP可成功转入洋葱表皮细胞且HcWD-40蛋白正确表达.激光共聚焦显微镜检测结果表明该基因表达产物分布于细胞质与细胞核中.[结论]目的蛋白HcWD-40定位于细胞质和细胞核内,可能间接或直接参与多种细胞过程的调控.