红麻细胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取及双向电泳体系优化

• 作者: 周瑞阳 廖英明 徐建堂 方平平 林荔辉 祁建民 陶爱芬
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 红麻 细胞质雄性不育(CMS) 提取方法 双向电泳(2-DE) ISO-DALT
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 1294-1299
• 页数: 6页
• 分类号: S563.5
• 字数: 4557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.07.018

摘要

为探讨红麻细胞质雄性不育形成的分子遗传机理,以红麻细胞质不育系L23A和保持系L23B开花期叶片为材料,对其红麻蛋白质双向电泳体系进行研究,比较TCA/丙酮和酚抽提法提取红麻叶片总蛋白,同时优化上样量和样品制备方法,建立了红麻蛋白质的双向电泳技术体系和凝胶成像染色法,利用PDquest软件分析双向电泳凝胶的相关差异蛋白.结果表明:(1)TCA/丙酮法比酚抽提法更适合于ISO-DALT电泳系统；(2)TCA/丙酮提取的红麻叶片粗蛋白平均产量为31.67 mg/g,是酚抽提法的1.77倍,但裂解效率为160 mg/g,是酚抽提法的36％；(3)每根胶条最佳上样量为300 μg; (4)考马斯亮蓝G-250比R-250以及银染色法效果更佳,在17 cm×17 cm的凝胶上平均可获得708个蛋白质点.本研究建立的红麻细胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取方法及双向电泳体系,可为揭示红麻雄性不育分子机理奠定基础.