鸡源大肠杆菌TEM-57型β-内酰胺酶基因的原核表达及酶特性

• 作者: 刘保光 刘建华 吴华 潘玉善 胡功政 苑丽
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 blaTEM-57型β-内酰胺酶 克隆 原核表达 酶特性
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 32-37
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文

摘要

对该临床菌株进行接合试验,采用PCR扩增获得blaTEM-57基因片段,定向克隆入表达载体pET-28a构建重组质粒,经酶切和DNA测序鉴定后进行诱导表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性.结果显示,耐药质粒成功从供体茵接合转移到大肠杆菌C600,接合子对青霉素类及氨基糖苷类药物耐药.PCR扩增产物电泳出现blaTEM-57目的条带.重组质粒经EcoR Ⅰ、Xhol Ⅰ双酶切及测序鉴定后,显示pET-28α/TEM-57原核表达载体构建成功.原核表达的最优条件为IPTG浓度0.8 mmol/L、温度37℃、诱导时间4h.blaTEM-57能水解氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻呋钠、头孢曲松钠、头孢噻肟钠及头孢哌酮,对头孢氨苄的Km最小为2.4,对头孢噻呋钠的Km最大为121.5；抑制剂舒巴坦钠和他唑巴坦对blaTEM-57水解抗生素有不同程度的抑制作用.pET-28α/TEM-57重组质粒得到成功构建和诱导表达,为进一步研究酶的其他特性及制备特异性的单克隆抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苑丽	河南农业大学牧医工程学院	96	702	15.0	22.0
2	潘玉善	河南农业大学牧医工程学院	77	422	12.0	16.0
3	胡功政	河南农业大学牧医工程学院	150	1300	20.0	29.0
4	刘保光	河南农业大学牧医工程学院	39	75	5.0	6.0
6	吴华	河南农业大学牧医工程学院	67	302	10.0	13.0
7	刘建华	河南农业大学牧医工程学院	92	705	14.0	22.0