猪输血传播病毒2型 ORF1基因的原核表达及条件优化

• 作者: 何孔旺 倪艳秀 周俊明 周忠涛 张文文 张雪寒 汪伟 温立斌 王东田 王小敏
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪输血传播病毒2型 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 页码范围: 38-43
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65|Q78
• 字数: 4354字
• 语种: 中文

摘要

为了克隆猪输血传播病毒2型（TTV2）ORF1基因，构建原核表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白，并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因，利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上，构建表达载体pcold-ORF1，在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素，即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化，确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。 SDS-PAGE分析结果表明，重组蛋白在BL21中高效表达，以包涵体形式表达为主，分子质量约为39 kDa。蛋白表达量随诱导时间增加而有所增加，在15℃时表达量最高，而IPTG浓度对蛋白的表达量没有显著影响。 Western Blotting 结果表明，重组蛋白与猪TTV2阳性血清特异性反应，具有很好的免疫原性。成功获得TTV2-ORF1基因，构建了原核表达载体并获得高效表达，为TTV的ELISA检测方法的建立提供抗原。且重组蛋白在15℃条件下，加入0．2 mmol/L浓度的IPTG，诱导24 h，表达条件最佳。