副溶血弧菌外膜蛋白ompK免疫磁珠检测方法的建立

• 作者: 向军俭 李雨辰 童吉宇 闻一鸣
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 副溶血弧茵 ompK 多克隆抗体 免疫磁珠
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 209-214
• 语种: 中文

摘要

构建重组基因克隆表达副溶血弧茵外膜蛋白ompK并制备多克隆抗体,建立副溶血弧茵的免疫磁珠富集,结合化学显色检测方法.利用生物软件Primer5设计副溶血弧菌ompK基因的引物,通过PCR扩增出ompK基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21进行优化表达.镍柱纯化表达产物,免疫小鼠,制备其多克隆抗体.Westem blot鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性.间接ELISA检测多抗效价及交叉性,并与proteinG磁珠偶联结合显色平板检测副溶血弧茵.结果显示,成功表达ompK蛋白；免疫小鼠获得特异性抗血清,效价为1∶64 000；Western blotting证明抗血清能与副溶血弧茵28 kD处条带特异性结合.制备的免疫磁珠敏感度最高能达到104 CFU/mL.成功克隆表达副溶血弧茵外膜蛋白ompK并制备副溶血孤茵特异性鼠多克隆抗体,建立的免疫磁珠检测方法与显色平板法结合较传统的二次增茵法能够节省72 h,整个过程只需要传统方法时间的1/3；相比于常用的免疫学检测方法检测灵敏度提高两个数量级.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向军俭	暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室	121	1163	18.0	26.0
2	李雨辰	暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室	1	7	1.0	1.0
3	闻一鸣	暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室	1	7	1.0	1.0
4	童吉宇	暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室	3	25	3.0	3.0