古樟ISSR扩增条件的优化

• 作者: 季春峰 杨光耀 王宗德 陈尚钘 黄萌
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 古樟 ISSR 反应条件 优化
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 116-120
• 分类号: S792.23
• 语种: 中文

摘要

采用改良CTAB法提取古樟叶片基因组DNA.利用单因素试验设计,对反应体系中退火温度、模板DNA含量、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量、去离子甲酰胺等7种因素不同梯度对扩增结果的影响进行了比较分析.结果表明:古樟ISSR-PCR最佳反应体系为,在20 μL PCR反应体积中,含50 ng DNA模板,2.5 mmol/L MgCl2,0.20 mmol/LdNTPS,1 U Taq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物浓度,2％去离子甲酰胺.该反应体系的建立为今后利用ISSR分子技术对古樟的遗传多样性分析提供了技术支撑.