甲型流感病毒核蛋白的表达与鉴定及其B细胞表位的预测

• 作者: 丁娜娜 刘冯欢 张菁 李婉宜 李明远 李燕 李莎 杨靖 王保宁
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 核蛋白 B细胞表位
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 824-828
• 页数: 5页
• 分类号: R394.8|R318
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2013.06.008

摘要

目的 构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定；预测人NP蛋白的B细胞抗原表位.方法 以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET-32a(+),并进行PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定,将鉴定正确的质粒转入表达菌Rosetta-gami(2)中,用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测表达产物.按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,采用Karplns-Schulz方法预测蛋白骨架区的柔韧性；用Kyte-Doolittle方法预测其亲水性,Emini方法预测蛋白质表面可能性及Jameson-Wolf方法预测抗原性指数.结果 成功构建了流感病毒核蛋白(NP)的原核表达载体,经SDS-PAGE检测NP蛋白得到了表达,Western Blot证明表达的重组蛋白具有免疫活性.在蛋白质第6～11、79～91、241～248和319～326区段附近很可能为B细胞表位优势区域.结论 流感病毒核蛋白的表达及B细胞表位的预测为流感病毒的快速诊断试剂的研发工作提供了基础.