ELISA法检测H3N2亚型流感病毒Vero细胞适应株

• 作者: 卢勇 吴雅楠 宋绍辉 廖国阳 李卫东 蔡玮 马磊
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 H3N2亚型 Vero细胞适应株 ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1811-1815
• 分类号: Q75|R373
• 语种: 中文

摘要

目的:流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005va(H3N2)是一株以Vero细胞为培养基质能高产的病毒株,可用于制备以Vero细胞为基质的流感病毒裂解灭活疫苗；通过在低温下连续传代培养,可选育出流感病毒Vero细胞冷适应株,用于制备Vero细胞流感病毒减毒活疫苗为了便于对Vero细胞冷适应株的进一步研究,建立一个检测该病毒株的ELISA方法.方法:以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va (H3N2)的纯化抗原为免疫原制备羊抗A/Yunnan/1/2005Va (H3N2)和鸡抗A/Yunnan/1/2005Va (H3N2)的抗血清.将抗血清先后经硫酸铵沉淀法和Protein G亲和层析柱纯化后,以纯化的羊抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2) IgG为包被抗体,鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2) IgG为第二抗体,测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA检测方法.结果:羊抗A/Yunnan/1/2005Va (H3N2) IgG的最佳工作浓度为5μg/mL,鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2) IgG的最适浓度为10 μg/mL,酶标抗体最佳稀释倍数为1∶4000.对已知的阳性样品,经双抗体夹心ELISA法测定的病毒滴度比血凝方法测定病毒滴度灵敏度高.结论:通过测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立了双抗体夹心ELISA检测流感病毒Vero细胞适应株病毒含量的方法.该方法操作简单、方便快速、敏感性高,可应用于Vero细胞冷适应株选育时对流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005va(H3N2)的检测,对于研制Vero细胞流感减毒活疫苗有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李卫东	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	14	44	4.0	6.0
2	宋绍辉	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	3	5	1.0	2.0
3	卢勇	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	5	34	4.0	5.0
4	蔡玮	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	2	5	1.0	2.0
5	马磊	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	3	4	1.0	2.0
6	吴雅楠	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	3	5	1.0	2.0