抗人Atg5单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 张小洪 张现伟 旷兴林 李志广 毕建虹 章崇杰 罗志娟 蒋小梅 魏大鹏
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 生物学
• 关键词: Atg5 单克隆抗体 Hela细胞株 宫颈癌
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 329-332
• 页数: 4页
• 分类号: Q813.2
• 字数: 3470字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2013.03.003

摘要

目的 制备抗人Atg5单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.方法 以人Atg5重组蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗人Atg5单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western Blot、免疫组化鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、亚型及亲和力常数.结果 成功筛选到一株能稳定分泌抗人Atg5单抗的细胞株1E7B3H9,亚型鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链.ELISA法测定腹水抗体效价为1:4.096×105,抗体亲和力常数为7.309×108 mol/L; Western blot显示此单抗能特异性识别人子宫颈癌Hela细胞系中的天然人Atg5蛋白；细胞免疫组化进一步显示Atg5表达在细胞质中.结论 成功制备了抗人Atg5单克隆抗体,为进一步研究其与宫颈癌关系及在临床上的应用奠定了基础.