Mre11多克隆抗体的制备及初步鉴定

• 作者: 任来峰 刘鳐 张付平 曾鸣 王海斌 王蕾 郭莲娣 马蕾
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 生物学
• 关键词: Mre11 多克隆抗体 原核表达 MRN复合体
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 325-328
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3508字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2013.03.002

摘要

目的 原核表达人Mre11蛋白,并制备出Mre11蛋白的多克隆抗体,为研究Mre11蛋白功能奠定基础.方法 以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a-Mre11,然后转化受体菌E.coli BL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将该融合蛋白免疫兔以制备出Mre11多抗血清,最后采用western-blot 及免疫荧光等方法检测其在细胞中的特异性.结果 在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达出了GST-Mre11融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得了高效价的Mre11蛋白抗血清,IP、western-blot及免疫荧光等多种方法检测证实该抗血清能够特异性识别293T和U2OS细胞株中Mre11蛋白,并能够正确清楚检测293T和U2OS细胞株中的Mre11表达情况,具有良好的特异性和高效性.结论 成功制备出了兔抗人Mre11蛋白的多克隆抗体,为深入研究Mre11蛋白在DNA损伤中的功能奠定了基础.