苦瓜基因组DNA的提取及ISSR扩增体系的优化

• 作者: 商桑 杨衍 田丽波 谷幸幸
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 苦瓜 基因组DNA 提取方法 ISSR 优化体系
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 园艺—研究报告
• 页码范围: 88-93
• 页数: 6页
• 分类号: S642.5
• 字数: 4723字
• 语种: 中文

摘要

为了快速获取高质量的苦瓜基因组DNA,以便进行苦瓜白粉病抗性基因分子标记研究,比较了不同的DNA提取方法、不同部位的苦瓜叶片提取基因组DNA的产量和质量,探究了苦瓜基因组DNA提取的最佳方法和叶片的最适部位；研究了ISSR-PCR的退火温度,并采用正交设计法对影响ISSR-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq酶、模板DNA以及引物浓度等5个因素进行了优化.结果表明,采用改良CTAB法从苦瓜顶端嫩叶中提取的基因组DNA OD260/OD280值在1.8～1.9之间,OD260/OD230值为2.0左右,对DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳检测,主带清晰,降解较少,产量和纯度均较高,效果较好.优化后的ISSR-PCR反应体系为:2.5 μL 10×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,250 μmol/L dNTPs,10 ng模板DNA,0.75 UTaq酶,引物浓度0.7 μmol/L,反应总体积为25 μL,引物UBC826最佳退火温度为53℃.该体系在多次重复中均能获得良好的扩增结果.苦瓜基因组DNA提取的最佳方法为改良CTAB法,最适合的部位为顶端嫩叶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田丽波	海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点试验室	28	170	9.0	12.0
3	商桑	海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点试验室	26	159	9.0	12.0
4	杨衍	中国热带农业科学院作物品种资源研究所	56	258	10.0	13.0
7	谷幸幸	海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点试验室	1	14	1.0	1.0