利用高效液相色谱测定柚苷酶水解食品糖苷

• 作者: 倪辉 杨远帆 肖安风 苏文金 蔡慧农 陈月龙
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 高效液相色谱 柚苷酶 柚皮苷 柚皮素
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 207-214
• 语种: 中文

摘要

柚苷酶能水解多种糖苷,在食品工业中具有重要的用途.相关文献报道的柚苷酶测定方法不能检测和监控食品糖苷的酶水解过程.本文利用液相色谱测定柚苷酶水解柚皮苷、熊果苷及杨梅苷等糖苷的底物和产物,从而探究柚苷酶在应用过程中的化学反应并测定其活力.采用的色谱分析条件:Symmetry C 18反相柱,检测波长280 nm,柱温35℃,进样20 μL,流速0.4 mL/min；流动相为水(A)、甲醇(B)及乙腈(C),溶剂的梯度洗脱程序是:0～7min,A/B/C (v/v/v)=62/12/26;7～9min,A/B/C (v/v/v)=15/35/50;9～15 min,A/B/C (v/v/v)=15/35/50;15～17min,A/B/C(v/v/v)=62/12/26; 17～20 min,MB/C (v/v/v)=62/12/26.该方法能有效分离柚皮苷、杨梅苷、熊果苷及水杨苷等底物及其水解产物；用该方法测定柚皮苷和柚皮素的相对标准偏差均小于1％,回收率分别在100.4％～105.2％,94.5％～117.3％.在50℃,pH 4.0的条件下,柚苷酶水解柚皮苷的米氏常数Km为0.10 mmol/L,最大反应速率Vmax为256 U/mg,Kcst为1 487/s.该液相色谱方法可检测柚苷酶对多种糖苷水解过程,能准确测定柚皮苷水解柚皮苷的酶活力及酶水解动力学,对于深入研究柚苷酶在食品中的应用具有重要作用.