提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率******★

• 作者: 万东方 张潮 曹锡梅 梁俊红 蒙晓平 郭大玮
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织构建细胞学实验 组织工程基础实验 血清淀粉样蛋白 A 转录激活因子 DNA 启动子区 鸟嘌呤 胞嘧啶 二甲基亚砜 高温预变性 退火温度 聚合酶链式反应 扩增效率 国家自然科学基金 组织构建图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 页码范围: 1251-1258
• 分类号: R318
• 字数: 7768字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.07.020

摘要

背景:血清淀粉样蛋白 A 转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功.目的:探索提高血清淀粉样蛋白 A 转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的 DNA 模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体系.方法:提取 THP-1细胞基因组 DNA 作为模板,通过97℃高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应的反应条件,在聚合酶链式反应扩增体系中添加不同浓度的增强剂二甲基亚砜改善反应体系.建立提高血清淀粉样蛋白 A 转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区聚合酶链式反应扩增效率的方法,同时评估不同浓度二甲基亚砜对聚合酶链式反应扩增结果的影响.结果与结论:97℃高温预变性使模板 DNA 充分解链,同时提高退火温度至60℃,有利于提高聚合酶链式反应扩增产率;反应体系中添加2%二甲基亚砜可以提高血清淀粉样蛋白 A 转录激活因子基因启动子区聚合酶链式反应产物的特异性和产率,但是鸟嘌呤和胞嘧啶含量不同对增强剂的依赖不一样.结果证实,高温预变性和较高的退火温度可以保证充分解链的模板 DNA 与引物特异性结合,但是 DNA 模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂二甲基亚砜的依赖有差异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭大玮	山西医科大学法医学院	45	25	2.0	2.0
2	曹锡梅	山西医科大学组织学与胚胎学教研室	33	59	4.0	6.0
3	张潮	山西医科大学法医学院	10	9	2.0	2.0
4	万东方	山西医科大学法医学院	5	7	2.0	2.0
5	梁俊红	山西医科大学法医学院	4	4	1.0	1.0
6	蒙晓平	山西医科大学法医学院	2	2	1.0	1.0