应用重组杆状病毒表达猪瘟病毒糖基化EO(Erns)蛋白

• 作者: 张纹纹 李文良 毛立 江杰元
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E0 重组杆状病毒 糖基化
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 50-53
• 页数: 4页
• 分类号: S855.3
• 字数: 2700字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR方法扩增出包含糖基化信号肽的猪瘟兔化弱毒疫苗株E0 (Ems)蛋白基因,末端引入6×His标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,将阳性重组质粒pF-E0转化DH10Bac感受态大肠杆菌,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组Bacmid质粒(rBac-E0).转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rAc-E0.经Western blot鉴定重组蛋白正确表达,且具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小为32 ku,表明重组蛋白为糖基化蛋白.这为进一步研究E0蛋白的功能、亚单位疫苗和诊断试剂的开发奠定了基础.