重组泛素连接酶tTRIP-U-box的构建与表达

• 作者: 李霞 王秦豪 茹懿 药立波 钟代星
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 重组泛素连接酶 破骨细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2013,（27）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5205-5208
• 分类号: Q75|Q78|R593.22
• 语种: 中文

摘要

目的:构建重组泛素连接酶tTRIP-U-box,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究通过靶向降解接头蛋白TRAF(TNF Receptor Associated Factor)家族蛋白,从而抑制破骨细胞活性提供基础.方法:分别设计引物,扩增tTRIP (TRAF-interacting protein)分子C端伸展的coiled-coiled结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box结构域,再利用重组PCR,将tTRIP与U-box进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK-293T细胞系,Western印迹验证重组质粒的表达.结果:PCR结果显示tTRIP截短分子和tTRIP-U-box条带大小分别为660bp和1188bp,重组质粒经酶切鉴定和测序证实正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论:成功构建真核重组表达载体pFLAG-CMV4-tTRIP-U-box,并且转染HEK-293T细胞系后证实其能够正确表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	药立波	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	160	1030	16.0	24.0
2	李霞	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	36	99	5.0	8.0
3	钟代星	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	17	78	5.0	8.0
4	茹懿	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	14	20	2.0	4.0
5	王秦豪	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	12	9	2.0	2.0