Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能

• 作者: 万力 刘季春 周学亮
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Notch信号通路 胞内结构域 质粒构建 H9c2心肌样细胞
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R-332
• 字数: 2834字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建Notch 1胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据.方法 设计并合成1对含有BamH Ⅰ和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His质粒,构建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表达质粒.通过双酶切及基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,48 h后提总蛋白,Western-blotting检测myc和Hes1,确定N1ICD能在H9c2细胞表达,并启动下游基因表达.结果 表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His双酶切及基因测序正确,N1ICD可在H9c2心肌样细胞内高效表达,具有Notch1生物学效应.结论 真核表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His构建成功,为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周学亮	南昌大学第一附属医院心脏外科	24	62	4.0	7.0
2	刘季春	南昌大学第一附属医院心脏外科	73	226	8.0	11.0
3	万力	南昌大学第一附属医院心脏外科	46	113	5.0	8.0