突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定*☆

• 作者: 姚文龙 张传汉 张登文 李立 石小云
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织构建细胞学实验 细胞周期末期促进复合物 Cdh1 定点突变 聚合酶联反应 真核表达质粒 神经系统 发育 神经损伤修复 基因治疗 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 315-319
• 分类号: R318
• 字数: 3621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.02.023

摘要

背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性.目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定.方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列.通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上.根据定点突变技术原理,以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版,针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物,将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A).最后通过测序鉴定.结果与结论:经电泳鉴定PCR扩增产物大小约为1500 bp,包括Cdh1基因完整的编码序列、编码序列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列,与预期相符.重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定与预期结果符合.DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组质粒pBluescript-Cdh1上突变为G,但氨基酸无变化,为同义突变,其他DNA序列无突变.经测序鉴定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒.突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸.提

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张传汉	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	113	532	13.0	17.0
2	姚文龙	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	33	52	4.0	5.0
3	张登文	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	12	32	4.0	5.0
4	李立	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	12	26	4.0	5.0
5	石小云	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	2	1	1.0	1.0