抗BP180NC16A IgE ELISA检测方法的建立

• 作者: 何春霞 刘冰 周细平 孙秋宁 左亚刚 李丽 李军 铁·杜尔娜
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 类天疱疮,大疱性 免疫球蛋白E 酶联免疫吸附测定 抗BP180NC16A
• 年，卷（期）: 2013,（28）
• 所属期刊栏目: 新技术新方法
• 页码范围: 2244-2247
• 页数: 4页
• 字数: 3539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2013.28.018

摘要

目的 建立抗BP180NC16A IgE抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,评价其在大疱性类天疱疮(BP)诊断中的意义.方法 采用pGEX-2T原核表达GST-BP180NC16A融合蛋白,并用谷胱甘肽亲和层析法进行纯化.采用棋盘滴定法确定抗原包被浓度,明确二抗及待测标本最佳稀释度,确定最佳实验条件.对2011年2月至2012年10月就诊于北京协和医院的56例BP患者、24名健康对照以及18例天疱疮、1例Stevens-Johnson综合征(SJS)患者血清进行检测,根据受试者工作特征(ROC)曲线确定最优阳性界值并评价其敏感度和特异度.结果 确定抗原包被浓度为500 μg/ml、酶标二抗最佳稀释倍数为1∶1000,血清标本采用原液及1∶10为最佳实验条件.根据ROC曲线判断最优阳性界值为0.549,实验的敏感度为71.4％、特异度为100％.天疱疮和SJS患者血清中此抗体均为阴性.结论 抗BP180NC16A IgE抗体检测方法具有较高的特异度以及相对较高的敏感度,在BP的诊断及发病机制的研究中具有重要意义.