CGRP修饰的间充质干细胞及其CGRP受体对血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响

• 作者: 刘志江 崔璨 敖竹君 石蓓 赵然尊 陈文明 龙仙萍
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 降钙素基因相关肽 间质干细胞 血管平滑肌细胞 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2013,（30）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2372-2376
• 页数: 5页
• 字数: 4172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2013.30.009

摘要

目的 观察降钙素基因相关肽(CGRP)修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)与血管平滑肌细胞(VSMCs)共培养后,MSCs分泌的CGRP对VSMCs增殖及表型转化的影响及其具体的作用机制.方法 将携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs(MSCsCGRP+/+),单纯慢病毒及PBS转染MSCs作为对照,应用ELISA法检测CGRP蛋白表达；携带RAMP1及shRAMP1的慢病毒载体转染VSMCs,实验分为Lenti-GFP-hRAMP1转染组(RAMP1+/+组)、Lenti-GFP-shRAMP1转染组(RAMP1-/-组)、Lenti-GFP转染组(GFP4/+组)和PBS转染对照组,应用Western印迹技术检测各组VSMCs中RAMP1蛋白表达.然后将MSCsCGRP+/+与过表达RAMP1及沉默RAMP1的VSMCs共培养,实验分为MSCs+VSMCs组、MSCsCGRP+/++ VSMCs组、MSCsCGRP+/++ VSMCsRAMP1+/+组、MSCsCGRP+/++ VSMCs RAMP1-/-4组；应用流式细胞术检测细胞增殖周期,MTT法检测细胞增殖率,Western印迹技术检测VSMCs收缩蛋白(α-SM-actin)和合成型骨桥蛋白(OPN)的表达.结果 过表达CGRP的MSCs其培养基中CGRP的表达量较对照组明显增加(19.530±0.498比3.133 ±0.160 and 3.120 ±0.001,P＜0.05)；过表达RAMP1及shRAMP1的慢病毒载体转染VSMCs后,RAMP1+/+组的RAMP1表达最多,而RAMP1在RAMP1-/-组表达最少.MSCs与VSMCs共培养后72 h,与MSCsCGRP+/++ VSMCs组比较,MSCsCGRP+/+ VSMCsRAMP1+/+组VSMCs增殖率明显增强(0.270±0.263与0.413±0.070,P＜0.05),停留在静止期的细胞数相对增加[(93.51±0.38)％与(84.48 ±0.31)％,P＜0.05],α-SM-actin表达显著增加(102 946±3847与51 759 ±635,P＜0.05),OPN表达明显降低(26 026±2595与44 201 ±2811,P＜0.05)；然而沉默VSMCs中的RAMP1后,MSCsCGRP+/+与VSMCs共培养后72 h,CGRP抑制VSMCs的增殖能力较过表达RAMP1的VSMCs明显减弱(0.601±0.04与0.270±0.263,P＜0.05),静止期的细胞数量减少[(78.57±0.68)％与(93.51±0.38)％,P＜0.05],OPN蛋白表达增加(53 933 ±1192与26 026±2595,P＜0.05),α-SM-actin表达减少(34 400±2179与102 946±3847,P＜0.05).结论 CGRP转染MSCs后,细胞能分泌目的CGRP蛋白.CGRP修饰MSCs能明显抑制VSMCs的表型转化及细胞增殖,这可能与CGRP受体表达上调增强CGRP效应性有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙仙萍	遵义医学院第一附属医院心血管内科	53	176	7.0	9.0
2	赵然尊	遵义医学院第一附属医院心血管内科	93	297	9.0	10.0
3	石蓓	遵义医学院第一附属医院心血管内科	183	503	10.0	12.0
4	刘志江	遵义医学院第一附属医院心血管内科	66	205	8.0	10.0
5	陈文明	遵义医学院第一附属医院心血管内科	18	45	4.0	5.0
6	崔璨	遵义医学院第一附属医院心血管内科	5	20	3.0	4.0