Ⅱ型胶原酶消化法培养兔关节软骨细胞

• 作者: 周必洪 张庆 林学义 苏友新 闫虎 陈宝军
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 软骨组织构建 软骨细胞 体外培养 Ⅱ型胶原酶 骨关节炎 退变 表型 软骨 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2013,（50）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 软骨组织构建
• 页码范围: 8647-8653
• 页数: 7页
• 分类号: R318
• 字数: 8800字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.50.005

摘要

背景：目前关节软骨细胞的分离培养技术已经比较成熟，但是研究中发现通过目前技术培养的软骨细胞生长周期慢，容易出现退变现象，不利于后续试验的进行。<br>　　目的：改进并探讨4周龄新西兰大白兔膝关节软骨细胞的分离与培养的方法。<br>　　方法：无菌条件下取4周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨，采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法，分离关节软骨细胞并进行原代、传代培养；采用形态学观察，甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对关节软骨细胞进行鉴定；MTT法检测关节软骨细胞增殖情况。<br>　　结果与结论：倒置显微镜下见膝关节软骨分离的原代软骨细胞6 h后开始贴壁，72 h可形成单层，96 h即可传代；前3代软骨细胞表型稳定，增殖力良好；第4，5代软骨细胞增殖能力减弱，绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞细胞质染成浅蓝色，细胞核染成深蓝色；免疫组织化学显示软骨细胞Ⅱ型胶原呈黄褐色阳性表达；MTT法检测表明前3代软骨细胞增殖差异无显著性意义(P>0.05)，且第1-3代与4代软骨细胞在培养第4-7天时，吸光度值差异有显著性意义(P<0.05)，与第5代软骨细胞在培养1-7天时，吸光度值差异有显著性意义(P<0.05)。提示采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法能够获得大量生长速度快且不宜退变的新西兰大白兔膝关节软骨细胞，且培养的前3代新西兰兔膝关节软骨细胞最为适宜。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏友新		90	877	17.0	24.0
2	林学义		9	73	5.0	8.0
3	张庆		8	52	4.0	7.0
4	陈宝军		12	62	5.0	7.0
5	闫虎		13	87	6.0	9.0
6	周必洪		6	52	4.0	6.0