Notch1 miRNA干扰质粒构建及功能鉴定

• 作者: 万力 刘季春 周学亮
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: Notch信号通路 微小干扰核糖核酸 干扰质粒
• 年，卷（期）: 2013,（13）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1447-1449,1453
• 页数: 4页
• 字数: 2433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2013.13.003

摘要

目的 设计及构建大鼠Notch1微小干扰核糖核酸(miRNA)干扰质粒,最终筛选出效果最好的干扰质粒.方法 针对大鼠Notch1基因分别设计3对pre-miRNA序列,通过T4连接酶克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体构建干扰质粒,基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光确定转染效率,Western blot检测3对干扰质粒、阴性对照质粒对Noteh1胞内结构域(N1ICD)表达的影响.结果 测序表明,Notch1干扰序列及读码框完全正确,荧光显微镜观察H9c2心肌样细胞miRNA瞬时转染效率在80％左右.Western blot显示miRNA6637对Notch1干扰效果最强.结论 成功构建大鼠Notch1 miRNA的有效干扰质粒.为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周学亮	南昌大学第一附属医院心脏外科	24	62	4.0	7.0
2	刘季春	南昌大学第一附属医院心脏外科	73	226	8.0	11.0
3	万力	南昌大学第一附属医院心脏外科	46	113	5.0	8.0