大鼠miR-126慢病毒表达载体的构建及其在肝星状细胞中的表达

• 作者: 卞兆连 盛黎 虢灿杰 马雄
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: rno-miR-126 miRNA 慢病毒
• 年，卷（期）: 2013,（36）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7001-7004
• 分类号: Q593.1|Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活并发生表型改变是肝纤维化形成的关键,本实验期待通过构建慢病毒rno-miR-126,并体外转染HSC,为研究miR-126在肝纤维化中的作用奠定实验基础.方法:PCR扩增miR-126的前体,构建miR-126的重组表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-miR-126,脂质体法转染包装细胞293TN细胞,包装产生慢病毒,以293TN细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达水平测定病毒滴度,构建重组慢病毒(Lentivirus,LV)载体(Lv-miR-126),体外转染活化的HSC-T6,荧光显微镜观察荧光阳性细胞百分率,real-time PCR检测miR-126转入水平.结果:经PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,成功构建携带大鼠miR-126基因重组慢病毒载体.倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293TN呈绿色荧光,并测得滴度108＞ ifu/ml.荧光显微镜下HSC的荧光阳性率在95％以上.Real-timePCR检测证实miR-126转染后获得了较高的表达.结论:成功构建大鼠慢病毒载体Lv-miR-126,并可在体外高效稳定表达,为本研究后续对miR-126靶点验证和功能研究奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马雄	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	61	251	9.0	13.0
2	虢灿杰	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	16	52	4.0	6.0
3	盛黎	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	8	29	3.0	5.0
4	卞兆连	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	8	10	2.0	3.0