RNA干扰对成肌细胞系L6中FOXO3a基因表达的影响*

• 作者: 丁洁 冯勇 朱志祥 梁炳生 贾英伟 达志峰 韦建
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织构建细胞学实验 肌萎缩 FOXO3a L6 失神经 RNA干扰 基因表达 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2013,（33）
• 页码范围: 5974-5980
• 页数: 7页
• 分类号: R318
• 字数: 6779字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.33.012

摘要

背景：最近的研究发现，一些因子在失神经骨骼肌萎缩的过程中发挥关键性作用，其中“feak-headbox”(Foxo)转录因子是调控骨骼肌萎缩最关键的分子。<br>　　目的：探讨RNA干扰技术体外抑制FOXO3a基因表达的效果。<br>　　方法：6孔细胞培养板中培养大鼠成肌细胞系 L6，使用 pEGFP-N1与 siRNA 重组质粒等比例在Lipofectamine2000介导下转染，优化与检测系统的转染效率；将2μg FOXO3a基因siRNA重组质粒转染L6，转染48 h与72 h。<br>　　结果与结论：①pEG FP-N1与siRNA重组质粒转染后48 h，荧光显微镜下可见细胞中有大量明亮的绿色荧光表达，显示系统有较高的转染效率。②实时定量PCR分析结果显示，转染后48 h和72 h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a mRNA的抑制率与未转染对照组相比差异均有显著性意义(P <0.05)，转染72 h与48 h相比，抑制效应更为明显，并以FOXO3a-Ⅰ的抑制效果最为明显。③Western印迹灰度分析结果显示，转染后48 h和72 h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a蛋白表达的抑制率与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)，转染72 h与48 h相比，抑制效应更为明显，与mRNA水平的影响一致。结果可见RNA干扰技术在体外能够明显抑制叉头蛋白转录因子FOXO3a基因的表达，FOXO3a基因siRNA重组质粒转染其干扰序列对FOXO3a的mRNA和蛋白抑制效果尚不明确，这可为RNA干扰介导的失神经骨骼肌萎缩基因治疗提供一种新的思路。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁炳生	山西医科大学第二医院骨科	119	543	11.0	15.0
2	贾英伟	山西医科大学第二医院骨科	27	164	8.0	11.0
3	达志峰	山西医科大学第二医院骨科	6	25	3.0	5.0
4	朱志祥	山西医科大学第二医院骨科	5	22	2.0	4.0
5	丁洁		5	5	2.0	2.0
6	冯勇	上海市第六人民医院骨科	4	4	1.0	2.0
7	韦建	山西医科大学第二医院骨科	3	3	1.0	1.0