毛梾ISSR-PCR反应体系的建立

• 作者: 刘伟 宋利伟 张存旭 李娜 杨玲 王豪
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 毛株 ISSR 单因素2次循环试验 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2013,（22）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 114-119
• 分类号: S792.99
• 语种: 中文

摘要

以毛株叶片为试材,通过单因素2次循环试验对毛株ISSR反应体系进行优化,建立了毛株ISSR-PCR的最佳反应体系和扩增程序.结果表明:PCR反应体系总体积为25 μL,其中10×Buffer 2.5μL,模板DNA用量50 ng,Taq DNA聚合酶用量1.5U,Mg2+浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6 μmol/L,dNTPs浓度0.15 mmol/L;扩增程序:94℃预变性5min; 94℃变性50 s,48.8～59.1℃退火60 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;最后72℃延伸10 min.在此基础上,从100条ISSR通用引物中筛选出17条多态性好、稳定性高的引物,并优化了它们的退火温度.这一优化体系的建立,为开展毛株种质资源鉴定、遗传多样性及分子育种方面的研究提供了技术依据和参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟	西北农林科技大学林学院	47	207	9.0	12.0
2	张存旭	西北农林科技大学林学院	39	393	12.0	18.0
3	李娜	西北农林科技大学林学院	61	289	10.0	15.0
4	杨玲	西北农林科技大学林学院	11	97	8.0	9.0
5	宋利伟	西北农林科技大学林学院	1	2	1.0	1.0
6	王豪	西北农林科技大学林学院	1	2	1.0	1.0