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pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒真核表达载体的构建
pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒真核表达载体的构建
作者:
李瑗春
李霞
王秦豪
白庆咸
茹懿
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl
pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒
重组质粒
CML
分段PCR
摘要:
目的:将Bcr-Abl及Bcr-Abl T3151突变克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶BCR-Abl,抑制肿瘤细胞生长提供研究基础.方法:pcDNA3.1 (-)-Bcr-Abl质粒构建:分别设计引物,通过分段PCR将BCR-ABL克隆入pcDNA3.1(-).首先通过PCR扩增出Bcr-a片段,将其克隆入pcDNA3.1(-)的NheⅠ/XhoⅠ之间;接着将PCR扩增出的Abl-c片段克隆入KpnⅠ/ HindⅢ之间,最后XhoⅠ/KpnⅠ双酶切pGD210,将酶切下片段插入pcDNA3.1(-)的相应位点即可.酶切鉴定及测序正确后,转染293T细胞,Western blot验证质粒的表达.pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151的突变质粒:首先设计引物,第一步以pcDNA3.1(-)-BCR/ABL为模板,以Abl-c-u和ba-M1为引物扩增出A-1:560 bp.第二步,相同模板,以ba-M2和ba-M-down为引物扩增出A-2:870 bp.第三步,以扩增出的A-1和A-2为模板,以Abl-c-u和ba-M-down为引物,扩增出1434 bp的片段A-l+2,以Bcl和Kpn Ⅰ分别酶切pcDNA3.1 (-)-BCR/ABL以及A-1+2,将突变后的A-l+2置换入pcDNA3.1 (-)-BCR/ABL.结果:PCR结果显示3.1(-)-Bcr-Abl及3.1 (-)-Bcr-Abl T3151突变质粒条带大小符合,重组质粒经酶切鉴定和测序结果正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论:成功构建pcDNA3.1 (-)-Bcr-Abl及pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151的真核表达载体,并且转染293T细胞后证实其能够正确表达,为后续研究奠定了基础.
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pcDNA3.1(+)
真核表达载体
内容分析
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内容分析
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篇名
pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒真核表达载体的构建
来源期刊
现代生物医学进展
学科
医学
关键词
pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl
pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒
重组质粒
CML
分段PCR
年,卷(期)
2013,(8)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
1408-1411,1455
页数
分类号
Q75|Q78|R733.72
字数
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
李霞
第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
36
99
5.0
8.0
2
白庆咸
第四军医大学西京医院血液内科
67
201
8.0
11.0
3
茹懿
第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
14
20
2.0
4.0
4
王秦豪
第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
12
9
2.0
2.0
5
李瑗春
第四军医大学西京医院血液内科
1
1
1.0
1.0
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
引文网络
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(0)
共引文献
(0)
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(1)
同被引文献
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参考文献(1)
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2010(2)
参考文献(2)
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2011(8)
参考文献(8)
二级参考文献(0)
2012(8)
参考文献(8)
二级参考文献(0)
2013(1)
参考文献(0)
二级参考文献(0)
引证文献(1)
二级引证文献(0)
2013(1)
引证文献(1)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl
pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒
重组质粒
CML
分段PCR
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
现代生物医学进展
主办单位:
黑龙江省森工总医院
哈尔滨医科大学附属第四医院
出版周期:
旬刊
ISSN:
1673-6273
CN:
23-1544/R
开本:
16开
出版地:
黑龙江省哈尔滨市和兴路32号
邮发代号:
14-12
创刊时间:
2001
语种:
chi
出版文献量(篇)
22114
总下载数(次)
63
总被引数(次)
99951
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