骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化*★

• 作者: 何少茹 刘玉梅 孙云霞 孙新 庄建 梁穗新 郑曼利 陈亮 陈晓博
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 流式细胞术 气管软骨细胞 分离 培养 诱导分化 鉴定 部级基金 干细胞图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（27）
• 页码范围: 4951-4957
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 7420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.002

摘要

背景：以骨髓间充质干细胞构建组织工程气管尚缺乏理想的特异性表面标志物，对其鉴定主要依赖细胞形态学、细胞表型及诱导分化的功能进行分析。目的：体外分离培养、鉴定兔骨髓间充质干细胞，观察在特定条件下向气管软骨细胞分化的潜能。方法：无菌环境取兔骨髓，经全骨髓贴壁筛选法分离培养细胞至第2代，流式细胞术鉴定第1、第2代细胞表面抗原 CD44、CD45的表达。无菌环境取气管，经酶消化法分离培养气管软骨细胞，甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞蛋白聚糖的合成。在使用转化生长因子β1的基础上，将骨髓间充质干细胞与气管软骨细胞通过Transwel 小室非接触式共培养，倒置显微镜观察细胞形态，甲苯胺蓝染色鉴定蛋白聚糖的合成，荧光实时定量 PCR 鉴定Ⅱ型胶原和蛋白聚糖 mRNA 的表达。结果与结论：分离、培养的细胞呈长梭形、不规则形聚集生长，传代后细胞生长速度明显增快，呈鱼群状聚集生长。第1代有96.97%的细胞表达 CD44、13.72%的细胞表达 CD45，第2代有99.11%的细胞表达 CD44、8.54%的细胞表达 CD45。气管软骨细胞甲苯胺蓝染色阳性。在诱导后，骨髓间充质干细胞形态逐渐由长梭形变为三角形或不规则形，表达软骨细胞特异性Ⅱ型胶原和蛋白聚糖 mRNA 基因，甲苯胺蓝染色示阳性。结果表明全骨髓贴壁筛选法可成功分离培养骨髓间充质干细胞，第2代纯度较高，且在特定诱导条件下具有分化为气管软骨细胞的潜能。