雌激素受体β基因沉默对成骨样MG63细胞骨保护素和RANKL表达的影响

• 作者: 刘少华 刘金洋 吴建煌 唐明星 张宏其 王昱翔 邓展生 邓盎 郭超峰 陈静 高琪乐
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 骨组织构建 雌激素受体β RNA干扰 人成骨样细胞 反转录病毒载体 骨保护素 RANKL 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2013,（41）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 骨组织构建
• 页码范围: 7188-7198
• 页数: 11页
• 分类号: R318
• 字数: 12436字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.41.002

摘要

背景：目前对雌激素β受体基因如何参与骨代谢的研究较少。目的：研究雌激素受体β对人成骨样细胞骨保护素、核因子kB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)表达的影响。方法：将先前含有最有效干扰序列及非特异性shRNA的反转录病毒分别感染人成骨样MG63细胞株后，筛选稳定克隆并扩大培养，以空白及非特异性shRNA作为对照，检测稳定抑制雌激素受体β的效率。分别向3组细胞即MG63细胞、雌激素受体βshRNA反转录病毒感染的MG63细胞、阴性对照shRNAnc反转录病毒感染的MG63细胞加入17β-雌二醇(E2)干预，检测人成骨样细胞株MG63的骨保护素、RANKL mRNA和蛋白表达情况。结果与结论：用pRNAT-H1.4/Retro-雌激素受体β-shRNA3进一步稳转人成骨样MG63细胞株，与空白及阴性病毒对照组相比，筛选出雌激素受体β表达稳定抑制的人成骨样细胞株，雌激素受体βmRNA 抑制率为(88.17±1.17)%(P<0.05)，蛋白抑制率为(89.01±1.22)%(P<0.05)，证实实验成功建立了人成骨样细胞ERβ亚型基因敲低细胞模型。雌激素干预48 h后，显示雌激素受体β稳定抑制的MG63细胞较空白组及阴性对照组骨保护素 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05)，RANKL mRNA和蛋白表达下调(P<0.05)，骨保护素RANKL表达上调(P<0.05)，提示雌激素受体β可能通过调节骨保护素/RANKL在骨代谢中发挥作用。