人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定

• 作者: 刘启才 孙曼 李祯 汪志辉 生秀杰
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子受体 卵巢癌 启动子
• 年，卷（期）: 2013,（26）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-29
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3021字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含人肝细胞生长因子受体(C-MET)启动子-223 ～ +60区域的荧光素酶报告基因质粒,并测定其在卵巢癌细胞株中的活性.方法 应用PCR法扩增获得含有人C-MET基因启动子-223～+60区域的DNA片段,将其连接至荧光素酶质粒pGL3-Basic中,得到pGL3-C-MET-Promoter重组质粒;经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定;将该质粒转染4株卵巢癌细胞,检测细胞中荧光素酶的活性.结果 双酶切及测序结果证实pGL3-C-MET-Promoter重组质粒插入片段序列正确,克隆的C-MET基因片段具有启动子活性,在卵巢癌细胞株OVCAR3细胞中的活性最高.结论 成功构建了pGL3-C-MET-Promoter报告基因重组质粒,为进一步研究C-MET对卵巢癌生物学行为的影响奠定了基础.