鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

• 作者: 周光宏 徐幸莲 汤晓艳 袁飞 陈明 陈爱亮
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鼠伤寒沙门氏菌 鞭毛蛋白FliC 原核表达 纯化 鉴定 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 180-184
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4092字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201309037

摘要

利用PCR扩增出鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fliC,连接到原核表达载体pET28a(+)上,测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS感受态细胞中,构建了原核表达系统.经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导及Ni-NTA纯化后,得到了带6×His纯化标签的分子质量大小约为54.6kD的表达产物,和预测蛋白大小一致,且大部分表达产物以可溶形式存在.利用Western-blotting进一步鉴定,结果表明,该蛋白能与抗His标签的单抗发生特异性反应.用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体,并对抗血清的效价和特异性进行检测,结果表明,多抗的效价较高,特异性较好.