Accutase酶在精原干细胞原代分离中的应用

• 作者: 刘珊珊 徐丽萍 朱蔚云 马宁芳
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 干细胞培养与分化 新生鼠睾丸 精原干细胞 Accutase酶 胰酶 透明质酸酶 磁珠分选 流式细胞分选 CD90.2 胶质细胞源性神经营养因子受体α1 国家自然科学基金 干细胞图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（45）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 7904-7910
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.45.013

摘要

背景：有研究报道胰酶消化在一定程度上会破坏精原干细胞表面抗原并影响细胞活性，对后续的细胞分选及下游实验有一定影响。Accutae 酶具有蛋白酶和胶原酶的双重活性，在消化结束时无需终止和清洗，有保护细胞表面抗原的特殊作用，因而被应用于多种干细胞的培养及消化传代中。<br>　　目的：比较Accutase酶和胰酶在原代消化分离睾丸组织获取精原干细胞中的作用。<br>　　方法：新生5-7 d昆明雄鼠45只，取双侧睾丸胶原酶初步消化，混悬液定容后分为Accutase酶组、胰酶组、混合酶组(透明质酸酶+胰酶组)，不同组别小鼠睾丸组织分别于酶消化1，3，5 min后显微镜下观察并拍照，比较各组不同时间点的消化状态及形成单细胞所需的时间；获取单细胞悬液后分别计算单位体积内所得细胞总数及死亡率；通过差速贴壁方法去除间质细胞及支持细胞，经包被有干细胞标志分子 CD90.2的免疫磁珠进行分选，将所得 CD90+及 CD90-细胞用精原干细胞表面标志分子--胶质细胞源性神经营养因子受体α1标记，流式细胞仪检测不同组别CD90+及 CD90-细胞群中胶质细胞源性神经营养因子受体α1精原干细胞的阳性率。<br>　　结果与结论：不同类别的消化酶对小鼠睾丸的消化作用有明显差异，其中 Accutase 酶能更快获取单细胞悬液，其细胞团及破膜细胞明显少于胰酶组和混合酶组，其所得细胞总数高于其余2组，而细胞死亡率则低于其余2组。差速贴壁后细胞免疫磁珠分选结果显示Accutase酶组CD90+精原干细胞得率高，流式分选结果显示胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90+细胞为72.24%，高于胰酶组及混合酶组(51.16%，71.27%)；而胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90-细胞比率(15.03%)则低于胰酶组及混合酶组(18.8%，24.23%)。结果表明Accutase酶在分离和获取精原干细胞实验中效果优于胰酶。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱蔚云	广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室	9	16	3.0	3.0
2	马宁芳	广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室	16	49	4.0	6.0
3	徐丽萍	广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室	13	5	2.0	2.0
4	刘珊珊	广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室	5	0	0.0	0.0