转TLR4基因的绵羊胎儿成纤维细胞系的建立

• 作者: 倪和民 刘云海 张全仓 曹玉桃 李方舟 郭勇 顾美超
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 TLR4 胎儿成纤维细胞系 转基因克隆
• 年，卷（期）: 2013,（35）
• 所属期刊栏目: 兽医—应用研究
• 页码范围: 63-68
• 分类号: S813.3
• 语种: 中文

摘要

为了通过脂质体介导的方法获得高效表达目的基因TLR4的绵羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,以便在胚胎移植前的体外筛选过程中确定优越的转基因供体细胞,从而提高体细胞核移植生产抗病转基因绵羊的效率.本研究通过优化脂质体与质粒载体的比例浓度,进而再去转染原代培养的绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选,以EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)作为报告基因,从形态学与分子水平鉴定出已经稳定表达目的基因:Toll样受体4(Toll Like Receptor4,TLR4)基因的细胞系.最终经过筛选与纯化得到3个表达目的基因TLR4的细胞克隆,经RT-PCR与相对荧光定量PCR分析,在第二代转染的细胞中TLR4的表达最高,相对于未转染的绵羊胎儿成纤维细胞升高了9.65倍(P＜0.01),并藉此为最终制备抗病转基因羊新品种,从提供稳定表达TLR4基因的转基因供体细胞系角度奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪和民	北京农学院动物科学技术学院	129	335	8.0	11.0
2	郭勇	北京农学院动物科学技术学院	115	301	8.0	12.0
3	刘云海	北京农学院动物科学技术学院	70	241	8.0	10.0
4	曹玉桃	北京农学院动物科学技术学院	2	5	1.0	2.0
5	李方舟	北京农学院动物科学技术学院	1	4	1.0	1.0
6	张全仓	北京农学院动物科学技术学院	1	4	1.0	1.0
7	顾美超	北京农学院动物科学技术学院	3	17	3.0	3.0