肝素黄杆菌硫酸软骨素酶AC的高效重组表达体系构建及其酶学性质研究

• 作者: 吴敬君 张翀 李晔 李梅 邢新会
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 亲和纯化 硫酸软骨素酶AC 酶学性质 表达量优化 麦芽糖结合蛋白 重组表达
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 127-134
• 页数: 8页
• 分类号: Q814.1
• 字数: 7498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201309027

摘要

为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC,ChonAC)在大肠杆菌中高效表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA,采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC),并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达,通过MBPTrapHP可实现一步纯化,使纯度可达95％以上,酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量).对MBP-ChonAC的酶学研究发现,其最佳催化pH值为7.5～8.0,最佳Ca2+浓度为20mmol/L,最适NaCl浓度为50mmol/L,最佳作用温度为20～35℃.MBP-ChonAC具有较好的热稳定性,在30℃时其半衰期可达8.3h.同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现,MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低,但是差别不大,表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响.通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量,其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张翀	清华大学化学工程系工业生物催化教育部重点实验室生物化工研究所	23	432	8.0	20.0
2	李晔	清华大学化学工程系工业生物催化教育部重点实验室生物化工研究所	14	66	5.0	8.0
4	李梅	清华大学化学工程系工业生物催化教育部重点实验室生物化工研究所	15	118	7.0	10.0
7	吴敬君	清华大学化学工程系工业生物催化教育部重点实验室生物化工研究所	2	10	2.0	2.0