内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化

• 作者: 周丽 周哲敏 堵国成 杜坤 陈坚
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白质剪接技术 内含肽 酶原活化 谷氨酰胺转胺酶 吸水链霉菌
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 90-94
• 页数: 5页
• 分类号: Q816
• 字数: 4389字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201309020

摘要

链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化.蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本.为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化.结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达.在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得).重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近；且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈坚	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	447	6664	38.0	58.0
5	堵国成	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	339	3648	30.0	42.0
6	周丽	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	45	190	7.0	11.0
7	杜坤	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	3	7	2.0	2.0
8	周哲敏	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	53	108	5.0	6.0