核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞前体的培养与分化

• 作者: 史伟 朱伟平 李中和 林琳 黄瑾
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 骨组织构建 核因子κB受体活化因子配体 破骨细胞 细胞培养 凋亡 单核巨噬细胞 矿物质和骨代谢紊乱 肾性骨病 骨髓细胞
• 年，卷（期）: 2013,（46）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 骨组织构建
• 页码范围: 7981-7987
• 页数: 7页
• 分类号: R318
• 字数: 7387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.46.001

摘要

背景：以往的研究多采用长骨机械分离法获得破骨细胞，破骨细胞为终末分化细胞，无法进一步增殖和传代。因此目前常用骨髓细胞诱导培养法和RAW264.7细胞诱导培养法获得大量的破骨细胞以满足实验需要。<br>　　目的：探讨细胞核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞前体细胞分化为成熟破骨细胞的最佳方法。<br>　　方法：分离小鼠骨髓细胞后添加核因子κB 受体活化因子配体与巨噬细胞集落刺激因子共同诱导或者取RAW264.7细胞单独加入核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞的形成；分别给予不同浓度的核因子κB受体活化因子配体，观察生成破骨细胞的数量，评价核因子κB受体活化因子配体与破骨细胞生成的量效关系；采用膜联蛋白V-FITC联合PI染色进行流式细胞术分析破骨细胞形成过程中单核巨噬细胞的凋亡情况。<br>　　结果与结论：当核因子κB受体活化因子配体浓度为10μg/L时，破骨细胞形成数量最多的时间点在第六至七天；而核因子κB受体活化因子配体浓度为100μg/L时，高峰期出现在第四至五天。破骨细胞的形成数量随着核因子κB受体活化因子配体刺激浓度升高而增加，呈浓度依赖性，50μg/L的核因子κB受体活化因子配体是破骨细胞形成数量与浓度关系曲线的转折点，高于150μg/L以后破骨细胞形成数量的增幅明显放缓。核因子κB受体活化因子配体即能诱导单核巨噬细胞形成破骨细胞又可以促进其凋亡，通过破骨细胞计数比较发现在同一浓度(104/cm2)接种单核巨噬细胞后以30μg/L的核因子κB受体活化因子配体诱导后，平均每单位核因子κB受体活化因子配体所获得的破骨细胞数量最多。提示骨髓细胞或RAW264.7细胞诱导破骨细胞的培养方法皆简单可行，细胞接种的最佳浓度为104/cm2；核因子κB受体活化因子配体的适宜刺激浓度为30-50μg/L。