腺苷同型半胱氨酸水解酶的表达纯化及活性测定方法建立

• 作者: 刘培 周建平 温新宇 王玲 田亚平 许秀丽 郝庆钦
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 关键词: 腺苷同型半胱氨酸水解酶 亲和层析 生物活性 DTNB显色
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 基础实验研究论著
• 页码范围: 1500-1502
• 页数: 3页
• 字数: 2538字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2013.12.004

摘要

目的 获得高纯度的重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH),并建立其活性测定方法.方法 运用基因工程技术,在大肠杆菌系统中原核表达重组SAHH,经过镍亲和层析和Sephadex G15两步纯化,得到目的 蛋白对其进行理化性质鉴定,并通过优化活性测定条件,确定SAHH活性测定方法.结果 终产物SAHH纯度为95%,相对分子质量为49 000,比活性为1 615 U/mg.在37 ℃、pH7.5的HEPES缓冲液中反应20 min为酶活性测定最佳条件,抑制剂可有效抑制酶活性.结论 通过基因重组技术可获得高纯度的SAHH,产物理化性质良好,活性测定方法成功建立,为循环酶法测定同型半胱氨酸工艺稳定放大提供可循依据,并且为SAHH抑制剂科学研究提供一种可靠的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玲	中国人民解放军总医院生化科	97	445	11.0	19.0
2	温新宇	中国人民解放军总医院生化科	5	31	2.0	5.0
3	刘培	中国人民解放军总医院生化科	6	11	2.0	3.0
5	周建平	中国人民解放军总医院生化科	10	46	3.0	6.0
8	许秀丽	中国人民解放军总医院生化科	7	9	2.0	3.0
12	郝庆钦	中国人民解放军总医院生化科	4	3	1.0	1.0