小鼠间充质干细胞三系分化中SOX9与Ⅱ型胶原mRNA的定量

• 作者: 康宁 杜少华 杨自权 梁大川 王震 白洁玉 程鹏 黄强开
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 干细胞培养与分化 骨髓间充质细胞 SOX9 Ⅱ型胶原 三系分化 成软骨 成脂肪 成骨 mRNA定量 国家自然科学基金 干细胞图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（36）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 6489-6494
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.017

摘要

背景：研究表明，软骨中的主要成分Ⅱ型胶原的基因-Col2a1在软骨细胞中的表达与SOX9的浓度呈剂量依赖正相关关系。<br>　　目的：通过成骨、成软骨、成脂肪诱导干细胞分化，分析3种分化过程及不同时期的SOX9与Ⅱ型胶原 mRNA含量的变化，探讨SOX9在不同时空分布的表达规律及与Ⅱ型胶原的相关关系。<br>　　方法：取4周龄昆明小鼠骨髓间充质细胞，体外培养得到间充质干细胞并传达至第3代，对间充质干细胞进行流式细胞仪鉴定细胞表型，共分3组每组设3个时间段，通过成骨、成软骨、成脂肪3种诱导培养液对3组细胞进行诱导，另设不进行诱导的细胞作为对照组。分别在诱导3，7，14 d后收集提取细胞的总RNA，通过RT-PCR进行SOX9与Ⅱ型胶原的mRNA定量检测，同时对诱导后的细胞进行染色、免疫荧光染色，观察其分化状态及相关统计分析。<br>　　结果与结论：第3代骨髓间充质干细胞生长良好，流式细胞仪鉴定细胞表型证实为干细胞，对诱导后细胞进行染色、免疫荧光染色结果证实细胞分化为骨、软骨、脂肪细胞。经RT-PCR检测，在3组诱导分化细胞中SOX9 mRNA 含量由高到低分别是成软骨、成骨、成脂肪，Ⅱ型胶原 mRNA 含量由高到低分别是成软骨、成脂肪、成骨。在成软骨分化中SOX9在3，7 d表达不断升高，14 d呈下降趋势。Ⅱ型胶原在3，7，14 d均逐渐升高。在成骨分化中SOX9 mRNA含量随着时间推移而增加，而Ⅱ型胶原则随着时间推移而不断降低。在成脂肪分化中SOX9 mRNA表达与对照组比较差异无显著性意义(P >0.05)；而Ⅱ型胶原的表达没有规律可循，时间点的延伸及检测未观察到。结果提示，SOX9在软骨分化中作用优于成骨、成脂肪组，且软骨分化中SOX9与Ⅱ型胶原存在相关性，可能在软骨分化的早期Ⅱ型胶原随着SOX9的变化而变化；且软骨分化和成骨分化过程中SOX9可能起到了一个互相协调促进平衡的关键作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王震	山西医科大学第二医院骨科	13	70	6.0	8.0
2	杜少华	山西医科大学第二医院骨科	4	26	3.0	4.0
3	杨自权		59	337	10.0	13.0
4	康宁	山西医科大学第二医院骨科	4	32	3.0	4.0
5	黄强开	山西医科大学第二医院骨科	5	19	2.0	4.0
6	白洁玉	山西医科大学第二医院骨科	8	37	4.0	6.0
7	程鹏	山西医科大学第二医院骨科	4	15	3.0	3.0
8	梁大川	山西医科大学第二医院骨科	8	34	4.0	5.0