小鼠VEGFR-2胞外片段重组蛋白的制备及其在检测抗VEGFR-2抗体中的初步应用

• 作者: 付晓 唐淑君 夏燕 李春阳 杨文 王艳林 肖博宇
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: 血管内皮生长因子受体2 原核表达 蛋白纯化 小鼠
• 年，卷（期）: 2013,（17）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 2793-2796
• 页数: 4页
• 字数: 4130字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2013.17.010

摘要

目的:原核表达和纯化小鼠血管内皮生长因子受体2 (VEGFR-2)胞外区功能片段并用于抗VEGFR-2抗体的检测.方法:用PCR技术扩增编码VEGFR-2胞外区的DNA片段,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)并转化大肠杆菌Rossetta(DE3).在尿素变性条件下用Ni-NTA树脂亲和层析纯化IPTG诱导表达的基因融合蛋白,并用抗His抗体和抗VEGFR-2抗体分别对融合蛋白进行Western blotting鉴定.ELISA法用于分析VEGFR-2胞外区功能片段在检测抗VEGFR-2抗体中的应用价值.结果:克隆获得为小鼠VEGFR-2胞外功能区(Aa 134-Aa417)编码的DNA片段并构建原核表达质粒.将上述质粒转化大肠杆菌后,高效诱导表达出VEGFR-2胞外区功能片段的融合蛋白.尿素变性条件下纯化的融合蛋白能特异性被抗His标签抗体和抗VEGFR-2抗体识别和结合.用上述原核表达的VEGFR融合蛋白建立的ELISA方法可检测样品中抗VEGFR-2抗体的含量.结论:本实验成功建立了VEGFR-2胞外区功能片段原核表达和纯化的方法,获得的VEGFR-2胞外区功能片段可用于抗VEGFR-2抗体效价的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王艳林	三峡大学分子生物学研究所	137	424	11.0	16.0
2	杨文	三峡大学医学院	12	23	3.0	4.0
3	夏燕	三峡大学分子生物学研究所	6	6	1.0	2.0
4	付晓	三峡大学医学院	5	11	1.0	3.0
5	肖博宇	三峡大学医学院	1	0	0.0	0.0
6	李春阳	三峡大学医学院	1	0	0.0	0.0
7	唐淑君	三峡大学化学与生命科学学院	1	0	0.0	0.0