Cx43基因shRNA慢病毒载体的构建及其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用

• 作者: 何艳 涂荣会 钟国强 陈立 黎庆捷
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌缺血 连接蛋白43 RNA干扰 慢病毒感染 大鼠
• 年，卷（期）: 2013,（21）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: R541
• 字数: 2575字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2013.21.001

摘要

目的 构建缝隙连接蛋白(Cx)43基因shRNA慢病毒载体,并检测其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用.方法 针对Cx43基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,挑选阳性克隆行PCR鉴定及测序.用pHelper1.0和pHelper2.0质粒转染293T细胞,包装产生具备感染能力的慢病毒.以293T细胞中绿色荧光蛋白的细胞数量计算病毒滴度；以最适感染复数感染大鼠心肌细胞,通过荧光显微镜观察感染效率；应用real-time PCR和Western blot法检测大鼠心肌细胞.Cx43 mRNA及Cx43蛋白表达,并评价其抑制效果.结果 经PCR鉴定和测序证实,Cx43慢病毒载体构建正确,其病毒滴度为8×108 TU/mL、转染效率为82.59％.荧光定量real-time PCR法检测Cx43 mRNA的抑制率为96.10％,Western blot法检测Cx43蛋白的抑制率为77.16％.结论 成功构建了Cx43基因shRNA慢病毒载体,其能显著抑制大鼠心肌细胞Cx43基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟国强		98	426	11.0	15.0
2	涂荣会		14	68	4.0	7.0
3	何艳		9	43	4.0	6.0
4	黎庆捷		7	31	4.0	5.0
5	陈立		4	21	3.0	4.0