重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定

• 作者: 张立超 李军明 林衡 胡学军 葛高顺
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: C反应蛋白质 甲醇酵母 诱导表达 分泌表达 免疫反应性
• 年，卷（期）: 2013,（28）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3390-3392
• 页数: 3页
• 字数: 2374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2013.28.022

摘要

目的：构建重组人C反应蛋白（rhCRP）甲醇酵母分泌表达菌株，表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法将人工设计合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表达载体pPICZαA上，经SacⅠ线性化得到重组质粒pPICZαA/rhCRP后转化至甲醇酵母X-33中，利用甲醇诱导进行分泌表达，并用组氨酸标签进行亲和层析纯化 rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting检测表达、纯化的目的蛋白，通过间接酶联免疫吸附试验（ELISA）鉴定其免疫反应性和稳定性。结果成功构建人CRP的重组甲醇酵母表达载体pPICZαA/rhCRP ，重组酵母菌株成功诱导分泌表达23×103的 rhCRP ；一步纯化即得纯度为90．42％的目的蛋白，间接ELISA法检测表明，纯化产物rhCRP具有特异的免疫反应性和一定的稳定性。结论利用甲醇酵母表达系统，成功获得了较高纯度的具有免疫反应性的rhCRP ，为下一步制备抗人CRP抗体及自主研发人CRP检测试剂提供重要的实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡学军	大连大学医学院	15	40	4.0	5.0
2	林衡	大连大学生命科学与技术学院	7	15	2.0	3.0
3	李军明	大连大学医学院	6	9	1.0	2.0
4	葛高顺	大连大学医学院	7	13	2.0	3.0
5	张立超	大连大学医学院	7	13	2.0	3.0