大鼠CGRP基因重组慢病毒载体的构建及滴度测定

• 作者: 刘志江 王冬梅 石蓓 许官学 陈攀科
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: 降钙素基因相关肽 慢病毒属 DNA ,重组
• 年，卷（期）: 2013,（34）
• 所属期刊栏目: ?基础研究?
• 页码范围: 4157-4159
• 页数: 3页
• 字数: 2837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2013.34.020

摘要

目的：构建含大鼠降钙素相关基因肽（CGRP）基因的慢病毒表达载体，为后续转染目的细胞并研究 CGRP 的功能奠定基础。方法通过基因工程技术将 CGRP 基因克隆到穿梭质粒中，构建 Puc57-CGRP 质粒，用双酶切法构建慢病毒表达载体（pLenO-DCE-CGRP），将该质粒载体与4种辅助包装质粒共转染293T 细胞，转染的293T 细胞继续培养48 h 后，收集其上清液，浓缩得到高滴度的慢病毒液，然后采用倍比稀释法和流式细胞术检测病毒滴度，并通过实时定量聚合酶链反应（PCR）检测293T细胞中 CGRP 基因的表达。结果成功构建了 pLenO-DCE-CGRP 的重组慢病毒载体，滴度为5．1×108 TU /mL 。结论成功构建了含 CGRP 基因高滴度的慢病毒载体，为后续转染间充质干细胞（MSC）并研究 CGRP 的功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石蓓	遵义医学院附属医院心血管内科	183	503	10.0	12.0
2	许官学	遵义医学院附属医院心血管内科	96	309	9.0	12.0
3	王冬梅	遵义医学院附属医院心血管内科	56	198	7.0	9.0
4	刘志江	遵义医学院附属医院心血管内科	66	205	8.0	10.0
5	陈攀科	遵义医学院附属医院心血管内科	18	52	4.0	6.0